Taq酶-友名生物公司

競爭性pcr(competitive pcr， c-pcr技術(shù)
c-pcr技術(shù)是競爭cdna模板與目的cdna同時擴增.使用同樣的引物，但一經(jīng)擴增后。能從這些目的cdna區(qū)別開來。通常使用突變性競爭cdna模板.其序列與目的cdna序列相同.不過模板中僅有一個新內(nèi)切位點或缺少內(nèi)切位點突變性的cdna模板可用適當?shù)膬?nèi)切酶水解，并用分光計測定其濃度。cdna目的序列和競爭模板相對應(yīng)的含量.可用澳化乙錠染色.電泳膠直接掃描進行測定或摻入放1射性同位素標記的方法測定。競爭模板開始時的濃度是已知的.則cdna目的序列的*初濃度就能測定。這種方法能準確測定mrna中cdna靶序列.可用于幾個到10個細胞中mrna的定量。
復合pcr(multiplex pcr)技術(shù)
在同一反應(yīng)中用多組引物同時擴增幾種*片段.如果*的某一區(qū)段有缺失則相應(yīng)的電泳譜上這一區(qū)帶就會消失。復合pcr主要用于同一病原體的分型及同時檢測多種病原體、多個點突變的分子病的診斷。
重組pcr技術(shù)
重組pcr技術(shù)是在兩個pcr擴增體系中，兩對引物分別由其中之一在其5°-端和3-端引物上帶.上一段互補的序列混合兩種pcr擴增產(chǎn)物.經(jīng)變性和復性。兩組pcr產(chǎn)物互補序列發(fā)生粘連。其中一條重組雜合鏈能在pcr條件下發(fā)生聚合延伸反應(yīng)，產(chǎn)生一個包含兩個不同*的雜合*。
巢式pcr(nest pcr枝術(shù).
先用一對靶序列的外引物擴增以提高模板量.然后再用一對內(nèi)引物擴增以得到特異的pcr帶。此為巢式pcr。若用一條外引物作內(nèi)引物則稱之為半巢式pcr。為減少 巢式pcr的操作步驟可將外引物設(shè)計得比內(nèi)引物長些，taq酶，且用量較少。同時在第yi次pcr時采用較高的退火溫度而第二次采用較低的退火溫度。這樣在第yi次pcr時，由于較高退火溫度下內(nèi)引物不能與模板結(jié)合，故只有外引物擴增產(chǎn)物，經(jīng)過若干次循環(huán)。待外引物基本消耗盡，無需取出第yi次pcr產(chǎn)物，只需降低退火即可直接進行pcr擴增。這不僅減少操作步驟。同時也降低了交叉污染的機會。這種pcr稱中途進退式pcr( drop-in， drop-out pcr)上述三種方法主要用于少量dna模板的擴增。
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