肉類DNA提取-武漢友名生物公司

elisa定量測(cè)定
elisa操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，肉類dna提取，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致，因此在定量測(cè)定中，每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法elisa，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線*高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)值，以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈s形，其頭、尾部曲線趨于平坦，*較呈直線的部分是相對(duì)理想的檢測(cè)區(qū)域。
測(cè)定小分子量物質(zhì)常用競(jìng)爭(zhēng)法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因*盒所用模式的差別而略有不同。elisa測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線注意圖中橫坐標(biāo)為對(duì)數(shù)關(guān)系，這更有利于測(cè)定系統(tǒng)的表達(dá)。
適用于ｐｃｒ研究的快速提取法：
1 田間剪取植株新鮮葉片5-10ｍｇ(約2ｃｍ長(zhǎng))左右，新鮮葉片放于1 5ｍｌ離心管中，存于冰盒中，根據(jù)樣品號(hào)貼上相應(yīng)的標(biāo)簽。
2 用剪刀將葉片組織剪細(xì)(約0 5ｃｍ長(zhǎng))放在點(diǎn)穴式研板中。
3 加入400μｌｄｎａ提取緩沖液，用玻棒將葉組織研細(xì)，直到液體變成深綠色即可。
4 再加400μｌｄｎａ提取緩沖液，混合均勻，轉(zhuǎn)入一新的1 5ｍｌ離心管(貼上相應(yīng)的編號(hào))。
5 加400μｌ氯1仿，混合均勻后，2400×ｇ離心30ｓ，將上清液轉(zhuǎn)入一支新的1 5ｍｌ離心管(貼上相應(yīng)的編號(hào))。
6 加800μｌ無(wú)水乙醇，混勻，2400×ｇ離心3ｍｉｎ。棄上清。
7 70%乙醇沖洗，風(fēng)干。
8 用50μｌｔｅ緩沖液溶解，存于-20℃。
9 取1μｌ用于ｐｃｒ分析。
dna提取過(guò)程中各種*的作用及原理
溶液ii-naoh-sds液：naoh：核酸在ph大于5，小于9的溶液中，是穩(wěn)定的。但當(dāng)phgt;12或phlt;3時(shí)，就會(huì)引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。 在溶液ii中的naoh濃度為0.2mo1/l，加抽提液時(shí)，該系統(tǒng)的ph就高達(dá)12.6， 因而促使染色體dna與質(zhì)粒dna的變性。
sds：
sds是離子型表面活性劑。它主要功能有：
(1)溶解細(xì)胞膜上的脂質(zhì)與蛋白，因而溶解膜蛋白而*細(xì)胞膜。
(2)解聚細(xì)胞中的核蛋白。
(3)sds能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為r-o-so3-…r -蛋白質(zhì)的復(fù)合物，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來(lái)。 但是sds能*核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取過(guò)程中，必須把它去除干凈，防止在下一步操作中 (用rnase去除rna時(shí))受到干擾。
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